Plateforme d'expression CHO (L-11266 / 11992 / 12273 / 12671)

Survol

Les systèmes d'expression mammifères faisant appel à des cellules CHO sont largement utilisés par l'industrie biopharmaceutique, et ont servi à produire cinq des dix produits biologiques les plus vendus en 2016 : Humira, Rituximab, Avastin, Herceptin, et EnbrelNote de bas1. Les cellules CHO représentent aussi le système d'expression de choix pour la R-D, facilitant la production rapide et à grande échelle de centaines de variantes de protéines recombinantes pour des essais à haut débit.

Depuis 20 ans, le CNRC a apporté des améliorations clés dans les vecteurs d'expression, les lignées cellulaires, les milieux et les procédés de culture qui composent sa plateforme d'expression CHO exclusive. Des améliorations dans l'expression stable et transitoire facilitent la production rapide, à haut rendement, et à coût abordable de divers types de protéines. Notre système d'expression inductible basé sur le commutateur cumate exclusif permet de démarrer ou de stopper l'expression d'un gène d'intérêt pendant la culture, une fonction complémentaire utile pour la production de protéines toxiques/cytostatiques ou l'ingénierie cellulaire.

Transfert de technologie

  • Licence non-exclusive pour l'exploitation R-D et/ou commerciale
  • Entente de R-D pour développement de lignées cellulaires sur mesure

Applications de marché

  • Expression transitoire de protéines recombinantes pour des fins de R-D
  • Expression stable et à grande échelle de protéines recombinantes et de candidats thérapeutiques pour des fins commerciales et de R-D

Comment ça fonctionne

Expression transitoire : CHO-3E7

Un clone CHO stable exprimant une forme optimisée d'EBNA1 (CHO‑3E7) a été développé pour sa capacité à rehausser la production de protéines recombinantes à l'aide de vecteurs pTTMC. Le vecteur pTTMC possède une cassette d'expression optimisée basée sur le promoteur du cytomégalovirus (CMV) ainsi que l'élément oriP, qui permet d'obtenir une productivité accrue. L'expression transitoire de gènes et la productivité peuvent être rehaussées encore davantage par la co-expression de la protéine kinase B (Akt) et l'addition d'acide valproïque suivi d'un changement de température.

Expression stable : CHOBRI MC

Cette plateforme utilise un système d'expression muni du commutateur cumate afin de générer des populations de cellules CHO qui expriment de manière stable des quantités de protéines entre 200 et 1000 mg/L en moins de quatre semaines post-transfection : deux semaines pour la sélection et expansion des populations, et deux semaines pour la production. Les populations peuvent être cultivées pendant des mois sous pression sélective tout en maintenant la productivité. Les populations maintiennent également leur productivité après décongélation.

L'utilisation d'une séquence d'attachement à la matrice nucléaire (S/MAR) dans le vecteur d'expression aide à augmenter l'expression et à prévenir l'atténuation transcriptionelle du transgène.

On utilise les populations de cellules CHO afin d'isoler des clones stables qui expriment 1-4 g/L d'anticorps monoclonaux et d'autres protéines recombinantes. Les clones sont stables sur plus de 100 générations et sont compatibles avec les Bonnes pratiques de fabrication (BPF). Plusieurs lignées CHOBRI MC sont présentement employées pour la production BPF de candidats thérapeutiques destinés aux essais cliniques.

Bénéfices

  • Production rapide, à haut rendement et à coût abordable de protéines à des fins de recherche et de biofabrication commerciale
  • Expression stable ou transitoire
  • Famille de vecteurs pTTMC validés
  • Choix de lignées cellulaires exclusives ou développement sur mesure de lignées cellulaires
  • Commutateur cumate permet de réguler le niveau d'expression d'un gène d'intérêt lors de la production
  • Milieu de culture sans sérum facilite le recouvrement de protéines recombinantes
  • Compatible avec les alimentations de culture disponibles dans le commerce; développement sur mesure d'alimentations

Brevets

  • CNRC dossier 11266 (vecteur/cassette pTTMC) : Brevets émis aux États-Unis, au Canada, en Europe et à Singapore.
  • CNRC dossier 11992 (lignée cellulaire CHO-3E7) : Brevets émis aux États-Unis et en Europe, en instance au Canada.
  • CNRC dossier 12671 (lignée cellulaire CHOBRI MC) : Transfert de secret commercial.
  • CNRC dossier 12273 (séquence S/MAR) : Brevets émis aux États-Unis, en Chine, à Singapore, et en Europe; en instance au Canada et en Corée du sud.
  • CNRC dossier 11225/11648 (commutateur cumate) : Brevets émis au Canada, aux États-Unis, et en Europe.

Personne‑ressource

Daniel Desmarteaux, Chef, Relations Client
Téléphone : 514-496-5300
Courriel : Daniel.Desmarteaux@cnrc-nrc.gc.ca

April Luong, Chef, Relations Client
Téléphone : 514-496-2745
Courriel : April.Luong@cnrc-nrc.gc.ca

pTT et CHOBRI sont des marques de commerce du Conseil national de recherches du Canada


Notes de bas de page

Footnote 1

https://www.nature.com/articles/nbt.3917/tables/8

Retour à la référence de la note de bas de page 1 referrer


Date de modification :